Kinetic Proof-Reading synes å spille en dominerende rolle Over Serie Utløsende For B Cell Activation

Dette er konsistent med eksperimenter som tyder på fravær av serie utløser i BCRsignaling. Vi brukte høy affinitet ligander i experimentsthat er konsistente med simuleringer utført med høy affinitet ligander som producevery lite serie trigging. Serial trigging potensielt kan spille en rolle i BCR stimulationby lavere affinitetsligander; synes imidlertid kinetic korrekturlesing for å spille en dominerende roleover serie utløsende for B-celle aktivering.

Vi har undersøkt følsomheten ofour viktigste resultater for lavere affinitet ligander. Det er meget sterk evidencesupporting forestillingen om at tonic BCR signalering finner sted i fravær av tilsatt ligand. Dette kan skje gjennom monomere BCRs eller pre-eksisterende microclusters, possiblybecause av interaksjoner som oppstår på grunn av noen lav konsentrasjon av antigen. Vi brukte firstorderreactions produserer lave mengder ITAM fosforylering og defosforylering torepresent slik tonic signalering. Vi har også utført simuleringer med et lite antall ofactivated ITAMs å representere en slik basal activation.Nilotinib leverandør

De kvalitative trekk ved våre resultater donoren endring i nærvær av en slik innledende konsentrasjon av ITAMs. I tillegg til disse betraktninger, SFKs og unboundBCRs diffundere med en diffusjonskonstant D ~ 0,01 2 /s i plasmamembranen, og ubundet Syk og SHP-1 molekylene diffus i cytosolen med en hurtigere diffusjonshastighet 2 /s). Flere detaljer er gitt i Materialer og Metoder og theSupplementary Materials. Vi undersøkte effekten av romlige BCR microclusters i in silico modellen byconsidering to scenarier. I det første scenariet, BCRs danne microclusters etter antigenbindende. I dette tilfellet, studerte vi Kinetikken når det er en på forhånd dannet microcluster ofBCRs med sine multivalente ligander. I det andre scenariet, trenger BCRs ikke danne microclusters.

Vi studerte kinetikken ITAM fosforylering når BCRs blir stimulert av strongaffinity antigener. Konsentrasjonene av fullt phosphorylatedITAMs tjene som markører for aktivering, fordi nedstrøms aktivering av varioustargets, slik som adapteren proteinet BLNK, Bruton er tyrosin-kinase, Rho-familyguaninine nukleotid leren faktor Vav, og Ca2 + tilstrømning er avhengig theproduction av fullt fosforylerte ITAMs. Når BCRs dannet en microcluster, gjorde theactivation av de ITAMs ikke viser en stor reduksjon i størrelse i fravær av SFKs. Hvis derimot en microcluster var ute av stand til å danne, ITAM phosphorylationdecreased i det vesentlige i fravær av SFKs.

Disse resultater antyder at Syk canpartially kompensere for fraværet av SFK-aktivitet i nærvær av reseptoren clustering.However de SFKs var ikke i stand til å gjenopprette ITAM fosforylering i Syk-deficientsystem uavhengig av arten av romlige clustering av BCRs .Disse resultatene kan mechanistically forstås på følgende måte. Når Syk moleculesare rekruttert av BCRs i en microcluster, de kan fosforylere nabo ITAMs, noe som igjen kan rekruttere flere Syk molekyler til microcluster å stimulere til videre ITAMphosphorylation. Denne positive feedback loop i ITAM aktivering hjelper Syk moleculescounteract fravær av SFK aktivitet. Men når BCRs hindres fromforming en microcluster, har en ITAM-bundet Syk-molekyl adgang til en mye mindre numberof nærliggende ITAMs.ALK inhibitor

Derfor er virkningen av den positive tilbakekoblingssløyfe er mye redusert i theabsence av romlig gruppering . I motsetning til dette, SFKs er ute av stand til å mediere slike apositive tilbakemelding, og følgelig kan ikke gjenopprette aktivering i Syk-manglende systemer, noe som fører til en stor reduksjon i omfanget av ITAM fosforylering uavhengig ofwhether reseptoren er gruppert. Vi merker oss at SFKs kan binde seg til singlyphosphorylated ITAMs med en enkelt SH2 domene med en meget svak affinitet som er about100- til 1000 ganger svakere enn bindingsaffiniteten av tandem SH2-domenene til Syk forfully fosforylerte ITAMs.