Hva er ELISA Detection?
en enzymbundet immunosorbent assay (ELISA) er en test utført i en immunologi laboratorium for å bestemme nivåer av protein i en biologisk prøve. ELISA deteksjon refererer til det siste trinnet av den test der en klar oppløsning, eller et substrat, blir tilsatt til en plastplate som inneholder bundet enzym-merket antistoff. Enzymet spalter substratet og en fargeendring inntreffer. Lys absorbans av den endelige fargede løsningen blir deretter målt på en ELISA-plateleser eller spektrofotometer.
Det finnes ulike typer av ELISA tester, med de to mest vanlige er den indirekte ELISA og fangst, eller sandwich, ELISA. Den indirekte ELISA anvendes for å påvise et protein, kjent som et antistoff, i en pasients serum. Et eksempel på en indirekte ELISA-test er humant immunsviktvirus (HIV) test som brukes for å påvise antistoff mot HIV. Sandwich ELISA testen påviser et protein, eller antigen, ved å fange den mellom to antistoffer. Påvisning av hormonet humant choriongonadotropin (hCG), som er forhøyet ved graviditet, er gjort med en sandwich-ELISA-test.
Ad
Begge testene har en ELISA deteksjonstrinnet ved slutten av analysen. Dette trinn innebærer tilsetning av et antistoff som har en enzym-molekyl knyttet til den. Etter tilsetning av enzym-merket antistoff, en fargeløs oppløsning, inneholdende substratet molekyl som er spesifikt for det enzym, tilsettes. Den enzym spalter substratmolekylet og løsningen endrer farge, avhengig av kombinasjonen benyttes. Bestemmelse av mengden av antistoff eller antigen i pasientprøven gjøres ved å måle intensiteten av fargeendring.
Det er flere enzymunderlagskombinasjoner som er tilgjengelige for bruk i ELISA deteksjonstrinnet. Den vanligste enzym er pepperrot peroksidase (HRP), som kan spalte substratmolekyler orto-fenylendiamin (OPD) og tetrametylbenzidin (TMB), blant andre. Spalting av både OPD og TMB resultat i en gul farge, og den optiske tetthet eller absorbansen av lys av disse substrater er målt ved en ELISA-plateleser. Den lysabsorbans av OPD blir målt ved en bølgelengde på 490 nanometer (nm), mens TMB måles ved 450 nm.
En annen vanlig enzym anvendt i ELISA deteksjonstrinnet er alkalisk fosfatase. Dette enzym blir anvendt med substratet p-nitrofenylfosfat (PNPP), og også frembringer en gul oppløsning. PNPP absorberer lys ved en bølgelengde på 405 nm.
Utvalg av de enzymunderlagskombinasjoner er vanligvis basert på det enzym-merkede antistoffer er kommersielt tilgjengelige, i tillegg til hva som utstyret vil bli brukt for å måle lys absorbans. De mange kombinasjoner tilgjengelig for ELISA deteksjon gjøre ELISA-testen svært allsidig. Det er et viktig verktøy i sykdomstesting og forskningslaboratorier.