Ved hjelp av en ELISA å avgjøre Antigen - antistoff Binding

Enzyme-Linked immunsorbent analyse, ELISA, er en svært følsom immunoeassay som brukes i stedet for radioimmunoassay siden det ikke involverer spesielle håndterings og avfallsdisponering krever arbeid med radioaktive stoffer. ELISA er avhengig av antistoffer for å påvise tilstedeværelsen av antigenene i væskeprøver, og dermed endre fra en klar væske til et farget en. Fordi de er antistoff-baserte, ELISA kalles immunoanalyser. ELISA kan oppdage små mengder av smittestoffer i prøver på en slik kroppsvæsker, før kroppen hadde hatt en sjanse til å montere en immunrespons. Ved eksperimentering ved anvendelse av en ELISA, antistoffene som er tilstede i prøvene binder seg til antigenet plate, og etter fjerning av overskudd av antistoff som kan bindes antistoffet påvises ved tilsetning av enzym-konjugert sekundært antistoff.

Formålet med denne studien er å undersøke to ting: For det første, er det antigen-antistoff-binding på en plate som inneholder to forskjellige antistoffer spesifikke for to forskjellige antigener: Hen Egg Lysozyme (HEL) og bovint serumalbumin ( BSA), og andre, hvor mye av binding er til stede i platen? For å undersøke disse spørsmålene, ved hjelp av en enzyme-linked immunosorbent assay for å hjelpe skjerm for antistoff-utskillende hybridomer, noe som er både meget følsom og rimelig å utføre. Prosedyren for å bruke en ELISA har økt forståelsen av bindinger av antigen og antistoff av slik testing som HIV, narkotika (marihuana), svangerskap, etc.

Formålet med en ELISA er å finne ut om spesielle antigen-antistoff bindinger er tilstede i en prøve; hvis det er antistoffer som binder til antigener tilstede, en ELISA-er med på å avgjøre hvor mye. Det er to hovedvarianter med denne metoden; en er slik at vi definerer mengden av antigen-antistoffbinding og den andre, nevnt tidligere, er slik at vi kan se hvor mye antistoff er til stede i vårt utvalg. I dette laboratorieeksperiment, har vi belagt en mikroplate med brønner med antigener. Antigenet blir sterkt absorbert av plast og forblir festet til brønnoverflaten gjennom hele prosedyren. Etter belegg og tilsetning av antistoffene, var vi i stand til å bestemme antigen-antistoffbinding.

I de fleste eksperimenter, forskere bruke BSA og HEL som ikke er relatert antigener å kontrollere for ikke-spesifikt antigen reaktivitet. For eksempel bør brønner belagt med HEL antigen ikke viser positive tegn når anti-BSA antistoffer er til stede, og vice versa. Dette betyr at mengden av enzym-konjugert antistoff som er bundet i hver brønn, er i stand til å hydrolysere et farveløst substrat for å gi et farget produkt.

Som konklusjon viser resultatene av å bruke en ELISA skulle komme til at antigener som binder seg til antistoffer, med de angitte antigener tilstede. Det sekundære antistoff er bundet til et enzym som er kjemisk endrer enzymsubstrat, vri fra en fargeløs oppløsning til en gul oppløsning. En side imidlertid oppmerksom på, være tomme brønner uten antigener som skal subtraheres fra styreplaten, men ikke danner hver av de antigen-belagte plater. Dette resulterer i det sekundære antistoff er kovalent bundet, konjugert, til et enzym som katalyserer en kjemisk reaksjon når den enzymsubstrat tilsettes. Dette vil frembringe en fargeendring hvis serumprøven inneholdt antistoff mot bakterier, fordi enzymet bundet, sekundært antistoff vil bindes til det primære antistoff som allerede er bundet til antigenet i brønnene.