Eksperimentelle Programmer for SILAC i Protein Interaction

Identifying MS og analysere protein kvantifisering er den viktigste teorien om denne teknologien for å dømme spesifikk binding protein agn. Når visse proteininnholdet i forsøksgruppe og en kontrollgruppe når statistisk forskjell, kan det være sikker på at agnet proteinene samvirke med proteins.Program oneTaking normal cellelinje som eksperimentelle material.1.Culturing celler med henholdsvis lette og tunge kjede amino. Når det er dyrket til fem og seks generasjoner, bør den samme mengde av celler som skal blandes, og proteinene også bør trekkes ut fra it.2.Extracting de lette og tunge kjeder proteiner, som skal bearbeides for IP-teknologi ved hjelp av spesifikke antistoffer av normal IgG og anti-agn proteins.3.Mixing IP-produkter av lette og tunge kjede proteiner, som deretter skal skilles med SDS-PAGE technique.4.Plastic indre fordøyelse, peptid ekstraksjon, rensing, identifisering og quantification.Program twoUsing over-express agn protein cellelinjer som eksperimentelle material.1.Culturing cellelinjer (med etiketter) av normale celler og over-uttrykte agn protein med lett og tung kjede aminosyre. Når det er dyrket til fem og seks generasjoner, den samme mengde av celler må blandes og proteinene kan extractd fra it.2. Den lette kjede og den tunge kjede av det totale protein cellene utvinnes bør være i bearbeidet av IP ved hjelp av taggen protein antibodies.3. Blanding av IP-produkter av lett og tung kjede proteiner og deretter vil det BW separert med SDS-PAGE.4. Plastic indre fordøyelse, peptid utvinning, rensing, identifisering og quantification.Program threeUsing cellelinjer av genet RNAi agn som eksperimentell material.1.Using lettkjeden og tung kjede aminosyre til kultur cellelinjer og kontroll cellelinjer av RNAi agn gener for fem og seks generasjoner, og deretter ekstrahere proteins.2.Extracting den lette kjede, den tunge kjede av det totale celleprotein og ved hjelp av spesifikke antistoffer, som er mot proteinet agn, for IP.3.Mixing IP-produkter av lett og tung kjeden proteiner og da er separert med SDS-PAGE.4. Plast indre fordøyelse, peptid ekstraksjon, rensing, identifisering og quantification.Advantages for anvendelse SILACCompared med tradisjonell CoIP eller trekke ned, SILAC har sterk spesifisitet, lav falsk positiv pol, en high-throughput, LC-MS og stor begrensning, samt detektering av den relative innhold av andre proteiner, som kan interagere med agn protein. Hva mer, sammenlignet med vitro merking teknikk, kan SILAC oppdage og kvantifisere tusenvis av proteiner nøyaktig og det er behov for færre proteinprøver. SILAC er et vivo merkingsteknikk, som ikke vil påvirke cellefunksjoner. Så det er mye brukt og velkommen i SILAC proteomikk analyse feltet.