Under hypoksisk betingelser | Cyclin-avhengige kinaser: Regulering Hif
Hypoksi-induserbar faktor 1 (HIF-1) er regulert av cellulær O2 tilgjengelighet gjennom O2-avhengige hydroksylering reaksjoner. Under hypoksiske betingelser, stabilitet av HIF-1? økt, og dermed forbedre bindingen av co-aktivatorer, og øke transkripsjon av HIF-1 målgener. I tillegg til proteasomer-avhengige reaksjonsveier for HIF-1? degradering, her har vi identifisert en vei der HIF-1? kan være målrettet for lysosomal degradering gjennom anstand-mediert autofagi.
For det første har vi funnet at det er fysisk og funksjonelt samspill mellom HIF-1? og cyklin-avhengig kinase 1 (Cdk1) og Cdk2. Celler transfektert med vill-type Cdk1 viste økt induksjon av HIF-1? ved eksponering for hypoksi, sammenligne med celler transfektert med kinase døde mutant.
Deretter bruker vi luciferase assay for å demonstrere at HIF1a transkripsjonen aktivitet økes ved Cdk1 løpet uttrykk. Dessuten bruker vi hemmere, som kan blokkere proteasome og lysosome å vise at regulering av HIF-1? av Cdk1 er proteasome uavhengig og lysosome avhengig.
I konklusjonen, dette arbeidet viser at HIF-1? nivåer er koplet til fasene av cellesyklusen gjennom lysosomal degradering og identifisere en ny rolle for lysosomet som en regulator av cellesyklusutvikling i henhold til hypoksiske betingelser. Dette kan være nyttig i bruk av Cdk1 hemmere i svulster med høye nivåer av HIF-1 ?.
nucleosome er den grunnleggende enhet DNA emballasje, som består av DNA og åtte histone protein kjerner. H4 er bare ett av dem. Modifikasjoner på histon halen kan forandre tettheten av kromatin, således regulere transkripsjon maskiner proteiner, og kontrollerer genekspresjon. Her rapporterer vi histon H4 hale regulere nucleosome ombygging.
H4 hale acetylering assosiert med transkripsjonelt aktive kromatin er tenkt å bidra til å forhindre ISWI-indusert nucleosome avstand ved aktivt transkriberte gener. Vi rekonstituert mono-nukleosomer med varierende linker lengder for å svare på spørsmålet om linker DNA regulerer nucleosome trans. De katalytiske subenheter av ISWI enzymer har en SF2-lignende ATPase.
auton domenet Snf2H og nukleosomale H4 halen er viktig for linker DNA lengde sensing av ACF kompleks. Til slutt testet vi den fysiologiske betydningen av den N-terminale region av Acf1 ved å studere rollen til dens homolog i gjær. Når forbindelsesledd DNA er kort, Acf1 bindes fortrinnsvis til den H4 halen, og den ATPase-aktivitet blir inhibert av Auton. Når DNA-mellomlengden øker, skifter Acf1 dets binding preferanse til linker-DNA, slik at det å aktivere ACF.
Til sammen tyder våre resultater et nukleosom-avstands mekanisme for ACF i hvilken forbindelsesledd DNA lengde avføles av Acf1 tilbehøret subenheten og allosterisk overføres til Snf2H katalytiske subenheten gjennom H4 halen av nucleosome
