Prosessen med HTS blir nyttig bare når resultatene av screening analyse er visualized

IntroductionThe viktig strategi for legemiddelutvikling i den moderne tidsalder innebærer screening av sammensatte biblioteker. Prosessen med HTS blir nyttig bare når resultatene av screening-analyse er visualisert. Denne visualiseringen oppnås ved å utføre høykvalitets HTS-analyser som benytter viss radioaktiv, fluorescens eller andre biofysiske metoder for å se endringene. Analysemetoder har til å bli utviklet og optimalisert i henhold til behovet for eksperimentet. Kunnskap om grunnleggende prinsipper for varierende utvalg av analyseteknikker er avgjørende for produktiv screening av målene i tid og kostnadseffektive manner.Biophysical analysen MethodsPrimary analyser er vanligvis gjøres i dublett eller singlet å velge treff. Når et positivt resultat ble oppnådd etter screening av flere hundre forbindelser i primæranalysen blir det oppnådde treff valgt og presise sekundære screenings er ferdig [1]. Biofysiske analyser er litt komplisert, men de gir svært gunstige og pålitelige resultater. Biofysiske metoder for påvisning i høy gjennomstrømming screening er av tre typer: Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Surface plasmonresonans (SPR) X-ray CrystallographyNuclear Magnetic Resonance (NMR) Forskjellige farmasøytiske og forskningsgrupper har tatt NMR i HTS grunn av sin naturlige synergi med medisinske og kombinatorisk kjemi. Den generelle metodikk for NMR-analysen innebærer følgende: Forbindelsene blir screenet for sine bindende slektskap med 15N merket proteiner. Bindende affinitet måles ved å observere forandringer i amid kjemisk skift i proteinbindingssetet. Når blyforbindelser er identifisert de er optimalisert for å gjøre opp manglene i riktig innbindings. Målene blir deretter screenet for den andre liganden. Andre ligand er også optimert for å gjøre det bindes hensiktsmessig med målet. 3D-strukturen til protein-ligand-komplekser blir generert for å bestemme størrelsen på linkeren. Den optimaliserte inhibitorer blir deretter koblet med en linker for å generere endelige inhibitor for målproteinet. Som et eksempel på denne fremgangsmåten ble et bibliotek av 32.000 forbindelsene screenet mot RGS4 (en regulator for G-protein signalisering). De 50 mest potente primære treff ble analysert ved NMR for bekreftelse. En forbindelse ble bekreftet som en inhibitor av RGS4 ved et unikt bindingssete [2] NMR er ofte brukt for optimalisering av kinase inhibitors.Surface plasmonresonans (SPR) HTS analysen kan også benytte overflate-plasmonresonans som et påvisningsverktøy. Denne teknologien innebærer binding av inhibitorer til overflaten festet protein mål. Polarisert lys faller på mål- og valens elektroner i en solid er svingte av denne hendelsen lys. Resonans oppnås når frekvensen til incdent fotoner blir lik frquency av oscillerende elektroner. Signal blir observert som en skarp skygge på det reflekterte lys fra overflaten. Den refleksjonsvinkel avhenger av massen av slois ved overflaten. Endringen i resonans vinkel (fra I til II i figuren) kan overvåkes ikke-invasiv i sanntid som en opptegning av resonanssignalet som funksjon av tiden. Denne teknikken gir svært nyttig informasjon om frekvensen av foreningen og dissosiasjon av inhibitor til underlaget [3]. "" X-ray CrystallographyX-ray krystallografi gir et innblikk i 3-D struktur av målet eller inhibitor-target kompleks med klarlegging av posisjon av atomer og kjemiske bindinger mellom dem. Beam av røntgenstråler fall på krystall strukturen av forbindelsene og blir deretter reflektert avhengig av arten av forbindelsen under observasjon. Imatinib, en tyrosinkinase inhibitor målretting Bcr-Abl målproteinet utnyttes røntgenkrystallografi. en inhibitor av p38 Kart kinase gir et eksempel. ledningene kan optimaliseres avhengig av data fra røntgenanalyse. »« ConclusionIn virkeligheten, bare en identifiseringsteknikker i høy gjennomstrømning screenings er ikke nok for bly optimalisering. I stedet er en kombinasjon av teknikker som kreves for å gi pålitelige resultater. Utvelgelsen av teknikker avhenger av arten av forbindelsen som blir screenet og prinsippet av teknikken som brukes. For eksempel er NMR god for inhibitorene som bindes svakt til dets substrat, mens X-ray er bedre for inhibitorer som gjør strengen assosiasjon med målet. ! Derfor kunnskap om alle mulige identifiseringsteknikk er verdt i utforskningen av gunstige stoffer Referanser Martis EA, Radhakrishnan R. høy gjennomstrømming resirkulering: The Hits og fører av Drug discovery En OverviewJournal of Applied Pharmaceutical Science 201, 1 (1 ): 02-10. Stockman BJ, Dalvi C. NMR screening teknikker i medisiner og narkotika design. Progress in Nuclear Magnetic Resonance spektroskopi 2002; 41: 187-231. Cooper MA. Optiske biosensorer i medisiner. Nature Drug Discovery 2002July; 1: 515-528.Related PostsHTS kinase AssaysVirtual Screening og HTS Relatert til Biofysiske analysemetoder i HTS miniatyrisering av HTS Analyser Innføring Suksess for en teknologi ikke er avhengig bare på kvaliteten eller mengden av resultater. Det er i stedet en multifaktoriell paradigme basert på en ... HTS Kinase Analyser Den mest avgjørende fordelen av høy gjennomstrømning screening er det lett å forstå og rask å utføre analyser som ga formidabel utfall. En av de mest ... Prosessen med HTS Trangen til å avsløre de skjulte sannheter i livet, for å avsløre skjult og å slippe løs grav, har vært naturlig for menneskers siden fødselen. ... Vær sosial, Del!