Bivalent og bispesifikt enkeltkjedet antistoff i å løse problemene med scFv

Antistoff er ikke fremmed for alle, selv en nyfødt baby. Det er det svarte hullet på den biologiske verden, så det er alltid noe nytt som tiltrekker biologer og forskere.
Siden den første suksess oppnås i enkelt kjede antistoff fragment (scFv) forskning av Bird og Huston i 1988 har fantastiske prestasjoner blitt gjort i forskning og utvikling av enkeltkjedet antistoff teknologi.
Men, i form av søknad, er det fortsatt problemer forblir uavklart. ScFv-fragmentene avledet fra fag display-antistoffbiblioteker vanligvis har kort halveringstid og mindre affinitet. Imidlertid viser multivalency av antistoffmolekyler seg å være en ønskelig egenskap i mange in vitro og in vivo-anvendelser. Etter mange års erfaring og stor innsats, har forskere og forskere fra Creative Biolabs gjennomført en rekke tilnærminger for bivalent og bispesifikt scFv og Fab konstruksjon, som kan i stor grad bidrar til dagens situasjon. (Bivalent og bispesifikke scFv /Fab)
Ifølge sine nyeste data, er det tre måter å generere genmodifisert og dimerisert scFv antistoff-fragmenter, miniantibody, diabody og Tandem scFv.

Figur 1. Skjematisk diagram av bispesifikke antistoff-

Miniantibody
Bivalent eller bispesifikt (scFv) 2, den såkalte miniantibody, fremstilles ved en kombinasjon av to scFv-molekylene med to modifiserte dimerization domener. Leucin-glidelåser benyttes for å mediere dimerisering av scFv i en miniantibody form. Det bygges dimerization kassetter som tillater konvertering av scFv antistoffer fra alle sine fag skjerm bibliotekene å Bivalent eller bispesifikke antistoffer. Under denne prosedyren, er enten Fos eller Jun leucine glidelåser smeltet til scFv proteiner. To cysteinrester ble konstruert i Fos og Jun glidelås domener for å frembringe disulfid-stabilisert homodimerer, noe som vanligvis fører til effektiv produksjon av stabile, utskilles homodimerer som er i stand til å beholde sin spesifisitet som målt i en rekke analyser.
< br /> Diabody
Diabody er en ikke-kovalent dimer av enkeltkjedet scFv fragmenter som består av den variable tungkjede (VH) og lettkjede-variable (VL) regioner forbundet ved hjelp av en liten peptidlinker . 14-15 aminosyrerester 'vanlige linkere er lange nok til å spenne over avstanden mellom den N-termini og C-termini av de variable domener i en scFv. Imidlertid, anvendelse av linkere av 3-12 aminosyrerester i lengde kan føre til dannelse av diabody.
Når to scFv forbundet med de korte forbindelsesledd er uttrykt i de samme cellene, vil to-funksjonelle antigenbindende seter bli dannet gjennom crossover sammenkobling av de variable lette kjeder og tungkjeder. Det bi-spesifikke diabody, som er konstruert med heterogene scFv, er også en viktig og brukte formen av rekombinant bi-spesifikke antistoff. Et distinkt trekk ved diabody er at den har en stiv struktur, og kan bli uttrykt i høye utbytter i bakterier. Se figur 2.

Figur 2. Skjematisk fremstilling av Diabody og Tandem scFv

Tandem scFv
Tandem scFv (taFv ) fremstilles ved å koble to scFv-molekyler med en kort linker. Denne formen for scFv har en meget fleksibel konstruksjon og er forholdsvis lett å bli generert. Både bakterie- uttrykk og folding på nytt og eukaryot ekspresjon er i stand til å produsere tandem scFv. Med mange års erfaring, har Creative Biolabs lykkes bygget over 100 tandem scFvs.
Det er verdt å nevne her at bispesifikt T-celle engager (bitt) er en unik form for tandem scFv. I en bite molekyl, en av de scFv bindes til T-celler via CD3-reseptoren og den andre til en tumorcelle via en tumor spesifikt molekyl. Ettersom denne fremgangsmåte bringer sammen T-cellen og kreftcelle, har det store muligheter i kreftterapi. (Bite). Se figur 2.