Generelle metoder for å forevige Primær Cells

Primary celler gi svært nøyaktig informasjon og relevante resultater i forskning, fungerer som de mest ideelle cellemodeller for et stort utvalg av forskning, fra grunnleggende cellebiologi og fysiologi, utviklingsbiologi, sykdomsmekanismer, til narkotika screening og legemiddelutvikling . Imidlertid, primære celler ikke vokse uendelig i kultur, og er meget vanskelige å dyrke. Derfor forskere har en tendens til å bruke immortaliserte celler for sitt forskningsprogram. De immortaliserte celler muliggjøre forskere for å bruke den samme konsistente materiale gjennom et prosjekt, uten å måtte etablere nye kulturer, fordi disse udødeliggjorte cellene har en forlenget levetid og vedlikeholde genotypen og fenotypiske markører for kilden vev. Utnytte en celle immortalization tjenesten hjelper forskerne å unngå dette problemet, og gir dem mulighet til en nesten ubegrenset tilgang på celler som kan brukes i hele varigheten av en hel forskningsprosjekt. Den vellykkede immortalisering av forskjellige primære celler er implementert ved anvendelse av forskjellige gener og agenter. Cell immortalization kan gjøres på mange måter; og tilpasset tjenesten er tilgjengelig i markedet for å bidra til å generere immortaliserte cellelinjer. Det finnes mange metoder for pattedyrcelle immortalization innenfor kulturmiljøer. Noen av disse metodene er listet nedenfor: hTERT Expression hTERT alene kan forevige cellene uten å forårsake kreft-assosiert endringer eller endre fenotypiske egenskaper. Primære humane celler som har hittil blitt etablert av tvang uttrykk for hTERT alene inkluderer fibroblaster, retinal pigmenterte epitelceller, endotelceller, øsofagus plateepitel celler, mammary epitelceller, keratinocytter, osteoblaster og nestin-positive celler i bukspyttkjertelen. En stor hindring for immortalization av primære humane celler og etablering av humane cellelinjer er telomer-kontrollerte alderdom. Telomer-styrt senescens er forårsaket av forkortelsen av telomerer som oppstår hver gang somatiske humane celler dele. Men forskere har vist seg at overføringen av et eksogent hTERT cDNA, som koder for den katalytiske subenhet av human telomerase, kan brukes for å forhindre telomerer forkortes, overvinne telomere styrt senescence, og immortalisere primære humane celler. Viral TransformationViral transformasjon metoden er en annen måte å omgå mobilnettet senescence. Den mest brukte og den best forstått av denne klassen av virale gener er Simian Virus 40 stort T antigen (SV40). SV40 stort T-antigen binder seg til en rekke proteiner (de viktigste er p53 og Rb) som, når det fungerer normalt, er negative regulatorer av celledeling. På samme måte bruker siRNA til inaktiv p53 og /eller Rb kan også starte ubegrenset cellular levetid. Andre onkogener inkluderer c-myc, Ras og HPV 16 E6 /E7 og deres introduksjon, på samme måte, effektivt kan forevige primære cells.Viral gener, inkludert Epstein-Barr virus (EBV) og Simian virus 40 (SV40) T antigen kan indusere immortalization. Viral gener oppnå immortalization ved å inaktivere de tumorsuppressorgener som setter cellene i en replikasjonssenescent state.Inactivation av Tumor Suppression GenesRecent funn har funnet at samtidig uttrykk for hTERT katalytisk subenhet kombinert med p53 eller RB siRNA, kan med hell forevige menneskelige eggstokkene epitelceller. På samme tid har overekspresjon av Ras eller Myc T58A mutanter har også blitt funnet å være i stand til å udødeliggjøre noen primære celletyper. Denne metoden gir en mer autentisk celle modell med en mer definert genetisk background.Custom Cell immortalization ServicesCreative Bioarray kan tilby tilpassede celle immortaliseringskonstruksjoner tjenester. Med mange års erfaring i celle immortalization, er selskapet nå i stand til å forevige celler fra menneske, mus, storfe og hund, med ulike immortalizing midler eller gener. Skikken immortalization tjeneste i betydelig grad kan forlenge replikasjonskapasitet på målet celler, noe som bidrar sparer lab tid og penger.